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大鼠Elisa試劑盒試驗詳細記錄是重點

更新時間：2015-03-02 點擊次數(shù)：1361次

　　本大鼠Elisa試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠S100蛋白(S-100)水平。用純化的大鼠S100蛋白(S-100)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入S100蛋白(S-100)，再與HRP標記的S100蛋白(S-100)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，大鼠Elisa試劑盒經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的S100蛋白(S-100)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠S100蛋白(S-100)濃度。

　　大鼠Elisa試劑盒操作程序

　　1．確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標板孔數(shù)目。

　　2．將倍比稀釋的標準品各0.1ml依次加入一排7孔中，1孔只加樣品稀釋液的作為對照。大鼠Elisa試劑盒處理后的標本按100ul每孔加入。

　　3．酶標板加上蓋，37℃反應90分鐘。

　　4．大鼠Elisa試劑盒反應后用自動洗板機吸去酶標板內(nèi)的液體；或甩去酶標板內(nèi)液體，再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。

　　5．將準備好的生物素抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應60分鐘。

　　6．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次，大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1分鐘左右。

　　7．將準備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應30分鐘。

　　8．0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次，大鼠Elisa試劑盒每次浸泡1-2分鐘左右。

　　9．每孔0.1ml依次加入TMB工作液，37℃避光反應，反應過程中，要經(jīng)常的觀察，當肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔差別不明顯時，即可加入TMB終止液0.1ml/孔。（顯色反應zui長不要超過30分鐘）。

　　10．大鼠Elisa試劑盒用酶標儀在450nm測定O.D.值。

　　11．根據(jù)樣品的吸光值在坐標上找出對應的濃度。用戶也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了N倍，其實際濃度應該×N。

　　大鼠Elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知OTR濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將OTR和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中OTR的濃度呈比例關(guān)系。

　　大鼠Elisa試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理，能測量鴨TNFα，只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學診斷。用戶須查閱文獻了解標本內(nèi)待測因子的含量，決定適當?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于大鼠Elisa試劑盒的*檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。

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